Читать онлайн «Диагностический справочник иммунолога». Страница 9

– иммунокорректоры бактериального происхождения (рибомунил, бронхомунал);

– интерфероны (мефенамовая кислота и др.);

– вытяжки тимуса (тималин, тимоген);

– иммуномодулятор местного действия ИРС-19.

Обычно препараты назначаются в зависимости от клинических проявлений под контролем иммунологического обследования.

Необходимость иммунологического обследования возникает в случае подозрения на первичную или вторичную иммунологическую недостаточность.

Обследование назначается при наличии у больного хронических бактериальных и вирусных инфекций различных органов; при отсутствии эффекта от проводимого лечения; в случае выявления иммунологических заболеваний при обследовании иммунологического статуса; при трансплантации органов и тканей. В табл. 3 указаны клинические показания для проведения лабораторных иммунологических исследований.

Таблица 3. Клинические показания к постановке лабораторных иммунологических тестов

Правила подготовки пациентов к обследованию, взятие и условия хранения материала для проведения исследования Для исследования используется венозная, капиллярная кровь, слюна, желчь и другие биологические жидкости. Забор крови производится утром натощак путем пункции локтевой вены в сухую чистую пробирку. У новорожденных применяют взятие крови из пуповины. У детей раннего возраста кровь берут из височной, лобной или яремной вены. Для исследования плазмы и форменных элементов крови используются мерные пробирки, в которые вносится антикоагулянт.

Срок хранения крови от момента забора до проведения анализа составляет 2 часа (при комнатной температуре), сыворотки – 48 часов (в холодильнике). Плазму можно хранить более длительно при температуре –20 °C.

Для исследования плазмы используется также капиллярная кровь, которую берут из указательного или безымянного пальца в объеме 0,5 мл в центрифужную пробирку. Плазму получают путем центрифугирования капиллярной крови. Осадок используется для приготовления клеточной суспензии.

Перечень общих требований для исследования и транспортировки материала:

– забор крови производится утром натощак;

– материал для исследования необходимо брать в достаточном объеме;

– материал немедленно должен быть доставлен в лабораторию в специальных контейнерах. Если это невозможно, материал хранят в холодильнике в течение 48 часов;

– материал должен быть промаркирован и иметь сопроводительные документы.

В настоящее время существуют различны методы, обеспечивающие количественную и функциональную оценку иммунной системы.

Некоторые методы исследования иммунного статуса

Количественная оценка содержания иммуноглобулинов (JgA, JgM, JgG) применяется для диагностики иммунной недостаточности и контроля за иммуномодулирующей терапией.

В случае первичных иммунодефицитов определяется снижение концентрации всех иммуноглобулинов или уровень JgA и JgG при нормальных показателях JgM (врожденная гипоглобулинемия) либо снижение JgA при селективной недостаточности.

Гипергаммаглобулинемия определяется при хронических инфекционных процессах, а также системных заболеваниях соединительной ткани. Гипергаммаглобулинемия не является специфическим симптомом и встречается при многих заболеваниях: миеломной болезни, макроглобулинемии, амилоидозе и других заболеваниях.

При миеломной болезни определяется подъем JgA или JgG.

Подъем JgM может появляться при макроглобулинемии.

Определение количества Т– и В-лимфоцитов в периферической крови

Основные функции иммунной системы выполняют 2 класса лимфоидных клеток: Т– и В-лимфоциты. Т-лимфоциты и часть В-лимфоцитов находятся в периферической крови и тканевых жидкостях организма.

Т-лимфоциты делятся на 4 группы:

– киллеры, уничтожающие чужеродные и собственные клетки;

– хелперы, которые принимают участие в дифференцировке клеток;

– эффекторы, выделяющие лимфокины и гуморальные медиаторы, которые вовлекают клетки в реакцию активации макрофагов, и т. д.;

– супрессоры, которые тормозят иммунный ответ.

Среди Т-лимфоцитов обнаружены клетки памяти, которые при повторном контакте с антигеном выполняют свои функции активнее, чем при первичном контакте.

При первичной встрече с антигеном синтезируются антитела, относящиеся к JgM (с 4-го по 7-й день), затем класса JgG, а в конце – класса JgA. При первичном контакте образуется клон В-лимфоцитов, имеющих иммунологическую память.

При вторичной иммунной симуляции вырабатываются антитела класса G. В норме число Т-лимфоцитов составляет 70–80 % от общего числа лимфоцитов периферической крови. При первичном иммунодефиците число Т-лимфоцитов снижается. Это наблюдается и при красной волчанке, и хроническом активном гепатите. Методы выявления Т-лимфоцитов основаны на выявлении поверхностных маркеров различных типов Т-лимфоцитов. Маркерами служат специфические антигены лимфоцитов и их рецепторы.

Для выявления Т-лимфоцитов применяются специфические сыворотки. К таким методам относятся цитотоксическая реакция, реакция иммунофлюоресценции, непрямой метод выявления антигенов Т-лимфоцитов с использованием белка А стафилококка, определение Т-лимфоцитов в ходе проведения теста с эритроцитами барана.

Методы определения В-лимфоцитов основаны на определении специфических антигенов В-лимфоцитов и их рецепторов. Существуют следующие реакции выявления В-лимфоцитов: антитоксическая с антисывороткой против антигенов, с антиглобулиновой сывороткой, метод обнаружения иммуноглобулиновых рецепторов с использованием стафилококков, содержащих белок; метод иммунофлюоресценции с меченными антисыворотками.

Применение радиоизотопных методов позволило установить существование 2 популяций лимфоцитов: короткоживущих (продолжительность их жизни около 4 дней) и долгоживущих (до 170 дней).

В периферической крови Т– и В-лимфоциты распределяются следующим образом:

– В-лимфоциты – 25–30 %;

– Т-лимфоциты – 60 %;

– ни В-, ни Т-лимфоциты – до 10 %.

Лимфоциты обеспечивают специфическую основу иммунитета. При первичном иммунодефиците отмечается снижение В-лимфоцитов. Повышение числа В-лимфоцитов диагностического значения не имеет.

Основные методы определения специфической реактивности

Существуют следующие методы.

1. Определение Т– и В-лимфоцитов и их популяций с эритроцитами барана или мыши.

2. Метод моноклональных антител, различающихся по СD-рецепторам, с использованием моноспецифичной сыворотки. Исследование проводится на люминесцентном микроскопе или проточном цитометре.

Определение количества иммуноглобулина

Проводится следующими методами:

1) радиальная иммунодиффузия в геле с моноспецифическими сыворотками по Манчини;

2) нефелометрический метод с моноспецифическими сыворотками по Чиркину;

3) иммуноферментные методы на ИФА.

Содержание иммуноглобулинов класса А, М, G изменяется при иммунодефицитных состояниях, определяется при вирусных гепатитах и миеломной болезни.

Особенно важно для дифференциальной диагностики и прогноза заболеваний.

Определение циркулирующих иммунных комплексов

Циркулирующие иммунные комплексы определяются при инфекционных и неинфекционных заболеваниях нефелометрическим методом.

Применение методов группы ЭЛИ-тест

Методы группы ЭЛИ-тест позволяют выявить специфические иммунные изменения, способы влияний на деятельность клеток различных типов.

Методы основаны на твердофазном иммуноферментном анализе, при котором выявляются аномалии в сывороточном содержании аутоантител класса JgG определенной антигенной специфичности.

Методы дают возможность анализировать характер изменений в сывороточном содержании аутоантител. Техника постановки методов указывается в инструкциях, прилагаемых к наборам иммунореагентов.

ЭЛИ-АИМ-тест определяет сывороточное содержание аутоантител к фрагментам ДНК, В2-гликопротеину-1, Fc-фрагментов иммуноглобулинов (ревматоидный фактор); выявляет содержание ряда естественных антител, который указывает на изменение общей активности иммунной системы.

ЭЛИ-Гамма-тест используется для мониторинга динамики подострых и хронических тканевых деструктивных процессов. При исследовании происходит оценка сывороточного содержания аутоантител, направленных к гамма-интерферону и его рецепторам.

ЭЛИ-ДИА-тест применяется для оценки содержания аутоантител, направленных к инсулину и инсулиновым рецепторам.

Повышение уровня антител к инсулину является признаком патологических изменений в бета-клетках островков Ларгенганса, типично для развития диабета I типа.

Повышение сывороточных аутоантител выявляется у больных, страдающих диабетической ангиопатией.